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J. Biomed. Mater. Res. Part B Appl. Biomater.:含CAGE的电纺蛋白支架的制备及其在皮肤伤口愈合中的应用
2021/1/12 13:56:24 易丝帮

DOI: 10.1002/jbm.b.34788

伤口愈合试图维持伤口内的稳态,同时尽量减少外来病原体(如机会致病菌)感染组织的风险。由这些病原体形成的生物膜是引起慢性感染的常见原因,而这些慢性感染通常会减缓愈合过程。与常规伤口敷料相比,由与皮肤相关的电纺丝蛋白组成的皮肤伤口愈合装置可加速愈合过程。在这项工作中,研究者采用静电纺丝法将抗菌离子液体/深共晶溶剂胆碱和香叶酸(CAGE)掺入这些装置中。通过1H核磁共振波谱验证了CAGE与敷料的结合,并使用扫描电子显微镜评估了其对所得器件材料性能的影响。含CAGE的装置显示革兰氏阳性和革兰氏阴性病原体(分别为大肠杆菌和铜绿假单胞菌)外源应用溶液的浓度依赖性失活,但仍保持了其作为人真皮新生成纤维细胞增殖兼容平台的能力。

 

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图1.制备支架的静电纺过程示意图。溶液通过带正电荷的针头从注射器中排出到带负电荷的铝收集器上,形成模拟人类细胞外基质的固体支架。


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图2.交联支架在894x放大倍数下的扫描电子显微镜图像:(a)对照支架(不含CAGE),(b)含5%CAGE的支架,(c)含10%CAGE的支架,(d)含20%CAGE的支架和(e)含40%CAGE的支架,然后干燥(1小时),使用碳带将其安装在铝制短管上,并用金-钯进行溅射镀膜(20秒)。


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图3.纯CAGE(蓝色)和从电纺支架中提取的CAGE(红色)的核磁共振谱。


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图4.外源应用(a)肠球菌或(b)铜绿假单胞菌与含有CAGE的支架孵育2小时后的存活率。两个曲线图均显示了对照(未浸渍)(深蓝色),含5%(橙色),10%(灰色),20%(黄色)或40%(浅蓝色)(vol:vol)CAGE的支架的结果。(*p<0.05,**p<0.01)


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图5.PrestoBlue®测定结果。


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图6.CyQuant®分析结果。


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图7.PrestoBlue®值除以CyQuant®值的图,代表每单位DNA的代谢活性。


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图8.hDFn细胞暴露于CAGE稀释液24小时后:(a)0mM;对照,(b)0.22mM,(c)0.44mM,(d)0.89mM,(e)1.77mM,(f)3.55mM,(g)7.09mM,(h)14.19mM,(i)28.38mM。


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图9.迁移到支架上的hDFn细胞的光学显微镜图像:(a)和(b)对照支架(无CAGE),(c),(d)和(e)含有40%CAGE的支架。


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图10.含40%CAGE的细胞化支架的扫描电子显微镜分析:(a)和(b)hDFn细胞(伪彩色并以蓝色突出显示)通过支架纤维迁移,(c)含有由hDFn细胞产生的新细胞外基质(ECM)的支架。对于存在细胞和ECM结构的细胞化支架与无细胞和ECM结构的非细胞化支架的比较,请参考图2(e)。


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