DOI: 10.1039/D0TB00779J
目前应用于周围神经工程的氧化石墨烯具有一定的局限性,例如细胞毒性和缺乏导电性,这两者对于调节神经相关细胞的行为至关重要。在这项工作中,研究者通过静电纺丝设计了还原氧化石墨烯-GelMA-PCL纳米纤维神经导管。rGO掺入GelMA/PCL基质中显著增强了杂化材料的电导率和生物相容性。而且,具有低rGO浓度(0.25和0.5wt%)的杂化纳米纤维可以显著改善雪旺细胞(RSC96)的增殖。更重要的是,rGO/GelMA/PCL杂化纳米纤维可以激活雪旺细胞(RSC96)上皮间质转化(EMT)相关基因的表达。在体内研究中,rGO/GelMA/PCL神经导管可以促进大鼠的感觉/运动神经再生和功能恢复。将rGO结合到生物相容性纳米纤维支架中的复合策略很简单,但有效地改善了组织工程效果。rGO/GelMA/PCL杂化纳米纤维在周围神经组织工程中具有巨大的潜力。本研究为电刺激在周围神经再生中的进一步发展提供了实验基础。
图1.rGO/GelMA/PCL纳米纤维的制备示意图。步骤1:DA的原位聚合将GO转化为rGO。步骤2:静电纺丝工艺,GelMA与rGO之间的共价键合以及GelMA的自聚合(在紫外线照射下)。(A)GelMA/PCL和DPA使杂化纳米纤维具有出色的生物相容性。(B)还原氧化石墨烯形成电通路,并为杂化纳米纤维提供了优异的导电性。(C)rGO/GelMA/PCL相互作用的示意图。
图2.rGO/GelMA/PCL杂化纳米纤维的表征:(A)-(E)具有不同rGO浓度的rGO/GelMA/PCL杂化纳米纤维的表面形态图像(A:0wt%rGO,B:0.25wt%rGO,C:0.5wt%rGO,D:0.75wt%rGO,E:1.0wt%rGO。比例尺=20μm。(F)具有不同rGO浓度的rGO/GelMA/PCL杂化纳米纤维的平均直径(对照:0wt%rGO,0.25rGO:0.25wt%rGO,0.5rGO:0.5wt%rGO,0.75rGO:0.75wt%rGO,1.0rGO:1.0wt%rGO)。*P<0.05。误差线=s.e.m.n>45。(G)具有不同rGO浓度的rGO/GelMA/PCL杂化纳米纤维的体外降解(对照:0wt%rGO,0.25rGO:0.25wt%rGO,0.5rGO:0.5wt%rGO,0.75rGO:0.75wt%rGO,1.0rGO:1.0wt%rGO)(H)具有不同rGO浓度的rGO/GelMA/PCL杂化纳米纤维的电导率(0.25rGO:0.25wt%rGO,0.5rGO:0.5wt%rGO,0.75rGO:0.75wt%rGO,1.0rGO:1.0wt%rGO)。
图3.RSC96在具有不同rGO浓度的rGO/GelMA/PCL杂化纳米纤维上的细胞行为(对照:0wt%rGO,0.25rGO:0.25wt%rGO,0.5rGO:0.5wt%rGO)。(A)-(D)在具有不同rGO浓度(A:0.25wt%,B:0.5wt%,C:0.75wt%,D:1.0wt%)的rGO/GelMA/PCL杂化纳米纤维上培养的RSC96的SEM图像。(E)-(H)培养24、48、72和96小时后的细胞增殖。*P<0.05,#P<0.05。误差线=s.e.m.n=3。
图4.在rGO/GelMA/PCL杂化纳米纤维支架上培养的雪旺细胞(RSC96)的EMT相关基因表达(对照:0wt%rGO,0.25rGO:0.25wt%rGO,0.5rGO:0.5wt%rGO),在细胞培养板上培养的RSC96作为阴性对照(RSC96)。在RS96组与对照组,0.25rGO或0.5rGO组之间,*P<0.05。在对照组与0.25rGO或0.5rGO组之间,#P<0.05。*P<0.05,#P<0.05。误差线=s.e.m.n=3。
图5.行走轨迹分析和电生理学。(A-C)植入12周后,对照组、0.5rGO组、自体移植组和正常组的足印和踏步模式。在0.5rGO组与正常组之间,#P<0.05,误差线=s.e.m.n=8。(D和E)对照组、0.5rGO组、自体移植组和正常组的CMAP幅度和面积。在坐骨神经近端与远端之间,*P<0.05。在0.5rGO组和正常组之间,#P<0.05。*P<0.05,#P<0.05。误差线=s.e.m.n=6。(F)对照组、0.5rGO组、自体移植组和正常组的运动神经传导速度。*P<0.05,误差线=s.e.m.n=6。