DOI:10.1016/j.ijbiomac.2020.07.278

在这项工作中，研究者提出了一种实现α-淀粉酶和辣根过氧化物酶（HRP）双重固定化的简便技术，即通过简单的混合步骤，将两种不同的酶模型包封在两种不同的聚合物电纺纤维中，并比较它们在单独固定化形式和游离形式下的性能。使用傅里叶变换红外光谱（FTIR）和场发射扫描电子显微镜（FESEM）对固定化进行了验证。双固定化HRP和α-淀粉酶的固定化效率分别为89％和85％。双固定化HRP和α-淀粉酶在10个循环后的催化活性分别为79％和80.2％。储存12周后，双重固定化酶仍保留与单独固定化酶相似的活性，接近于90％。相对于不同的酶活性测定方法，该固定方法似乎对两种酶均未产生负抑制或反抑制作用。这种方法表明，两种或多种类型的酶可以分别与不同的聚合物混合，并同时进行静电纺丝。作者认为该方法有望大大促进和扩展多酶系统的应用，同时为酶介导级联反应的深入研究奠定了坚实的基础。

图1.酶（HRP和α-淀粉酶）的双重固定化过程。

图2.含α-淀粉酶和HRP的电纺纤维的FESEM图像。

图3.PCL（PCL），聚碳酸酯基聚氨酯（Carb），PCL与聚碳酸酯基聚氨酯（PCL/Carb）以及封装α-淀粉酶和辣根过氧化物酶的PCL与聚碳酸酯基聚氨酯（PCL/HRP+Carb/淀粉酶）的ATR-FT-IR光谱（A）和扩展区域的ATR-FT-IR（B，C）。

图4.单独和双重固定化HRP（a），单独和双重固定化α-淀粉酶（b）的再利用。每个点代表三次实验的平均值±SE。

图5.pH的影响。

图6.在4℃下的存储稳定性。

图7.（a）愈创木酚和（b）H2O2浓度下过氧化物酶活性以及（c）淀粉存在下α-淀粉酶活性的Lineweaver-Burk图和底物饱和曲线。