DOI: 10.1002/jbm.a.36962

生长因子（GF）递送是脊髓损伤修复的常见策略，但是，GF的降解会阻碍长期治疗。众所周知，通过肝素隔离GF可以保护递送后的生物活性。研究者测试了两种肝素修饰物，甲基丙烯酸肝素和巯基化肝素，并与甲基丙烯酸透明质酸（MeHA）进行静电纺丝形成了HepMAHA和HepSHHA纳米纤维。对于负载条件，将MeHA、HepMAHA和HepSHHA纤维与可溶性bFGF或NGF孵育，并用PBS冲洗。对照组在PBS中水合。在生长培养基或补充bFGF的培养基中培养24小时后，分析了L929成纤维细胞的增殖情况。在无血清培养基（SFM）或补充NGF的SFM（SFM+NGF）中培养三天后，测量解离的鸡背根神经节神经突。在生长培养基中，与其他组相比，负载的HepMAHA中成纤维细胞增殖显著增加（α<0.05）。在SFM中，与所有其他组相比，负载的HepMAHA的平均神经突长度最长。在SFM+NGF中，与MeHA相比，HepMAHA和HepSHHA的神经突长度增加，无论负载量如何（α<0.01），这表明可溶性NGF的主动隔离。HepMAHA是一种在脊髓损伤环境中隔离释放GFs的有希望的生物材料，并且可以与GF填充的微球结合用于未来研究。

图1：电纺纳米纤维的扫描电子显微照片。A：MeHA，B：HepMAHA，C：HepSHHA。比例尺为10µm。显微照片显示，在不同类型的纤维中，具有类似结构的平滑定向纳米纤维。D：显示纳米纤维浓度的表格。显示三种纤维类型的纳米纤维排列和纤维直径。纤维排列是指在30度范围内的纤维百分比，其中发现了纤维百分比最高的频带。纤维直径是平均值±标准偏差。N=5个SEM图像。（缩写：纳米，nm）

图2：在存在肝素修饰纳米纤维的情况下，L929成纤维细胞的增殖，以alamarBlue的百分比减少表示；随着细胞的增殖，alamarBlue试剂会减少，据报道可近似于细胞增殖。将负载的纤维暴露于100 ng/ml bFGF，然后在细胞培养之前用PBS漂洗7次。黑色误差条表示标准偏差。A：在生长培养基中，负载的HepMAHA与所有其他条件显著不同（*，p<0.05）。B：在补充FGF的培养基中，负载的HepMAHA与负载的HepSHHA显著不同（$，p<0.05）。

图3：在存在肝素修饰纳米纤维的情况下，用A：SFM和B：SFM+NGF培养的平均神经突长度。将负载的纤维暴露于100 ng/ml NGF，然后在细胞培养之前用PBS漂洗7次。误差条表示标准偏差。*表示肝素-透明质酸的生长因子隔离条件与所有其他条件显著不同（p<0.01）。＃表示肝素-透明质酸的生长因子隔离条件与负载的MeHA显著不同（p<0.01）。$表示肝素-透明质酸的生长因子隔离条件与负载的HepSHHA显著不同（p<0.01）。+表示肝素-透明质酸的生长因子隔离条件与负载的HepMAHA显著不同（p<0.01）。

图4：抗神经丝和FITC显示的纤维上的突起延伸示例。所有图像都遵循右上角的100µm比例尺。A至F是在SFM中生长的神经突。G到L是在SFM+NGF中生长的神经突。神经突在MeHA（A，G）、HepMAHA（B，H）、HepSHHA（C，I）、负载的MeHA（D，J）、负载的HepMAHA（E，K）、负载的HepSHHA（F，L）上生长。