DOI: 10.1002/jbm.a.36957

在这项研究中，检验了水飞蓟素和培养有人沃顿胶体（HWJMSC）间充质干细胞的聚乳酸/碳纳米管（PLA/CNT）电纺支架治愈大鼠颅骨关键性缺损的能力。在这项研究中，将20只成年雄性Wistar大鼠分为四组，每组五只。在全身麻醉的情况下，大鼠的颅骨中产生了8 mm的缺损。然后，将研究组分别定义为不治疗组、仅支架组、支架和HWJMSCs组以及支架/细胞加口服水飞蓟素组。使用H＆E染色和戈德纳-马森三色染色作为特异性染色进行组织形态计量学研究。这项研究的结果表明，电纺PLA/CNT支架是一种生物相容性支架，HWJMSCs可以在该支架上大量附着并增殖，并且支架本身也是改善骨修复过程的合适选择。组织形态计量学分析的结果还显示，与单独的支架和细胞组相比，支架/细胞和水飞蓟素组中新骨形成量明显更高（p<0.05）。利用水飞蓟素和在PLA/CNT支架上培养的HWJMSCs可作为成骨和骨修复过程的合适方法。

图1：图像是由电子显微镜拍摄的。A：放大倍数为200μm的无细胞PLA/CNT支架，B：放大倍数为20 µm的无细胞PLA/CNT支架，C：放大倍数为20μm的无细胞PLA/CNT支架的纤维存在明显的孔，D：48小时后在支架PLA/CNT上培养的HWJMSCs。

图2：通过倒置显微镜对HWJSCs的形态学研究。A：HWJSCs的表观形态，密度约为60％；B：HWJSCs第3通道的表观形态，密度约为90％。20倍放大拍摄。

图3：在PLA/CNT支架上培养的吖啶橙和溴化乙锭染色细胞的图像。A：在PLA/CNT支架上培养的HWJMSCs用浓度为100μg/ml的吖啶橙/溴化乙锭染色，（10倍放大），B：在支架上培养的HWJMSCs细胞用浓度为1000μg/ml的DAPI染色（以20倍放大），C：孵育后48小时，在PLA/CNT支架上检测溴化乙锭染料标记的HWJMSCs细胞的结果，通过荧光显微镜成像（以20倍放大）。

图4：通过MTT法测定在PLA/CNT电纺支架上培养的HWJMSCs的活力分析图。在培养后的第1天和第3天，甲酰胺的光吸收是测量和比较二维（作为对照）和3D培养（在支架上）中细胞活力的一个因素，每个实验至少重复3次。不平衡字母表示在p≤0.05时存在显著性。

图5：不同组中碱性磷酸酶的活性图。A组：对照组，B组：单独的支架组，C组：支架组加细胞，D组：支架组加细胞和水飞蓟素。非连续字母表示在p<0.05的置信水平上存在显著性差异。

图6：苏木精-伊红染色组1：对照组，组2：单独的支架组，组3：支架组加细胞，组4：支架组加细胞和水飞蓟素。A：缩放40倍，B：缩放100倍，C：缩放400倍，D：缩放400倍。黑色矩形：一个选定的区域，需要进一步放大；红色矩形：在D部分中以更高的放大倍数显示了支架位置；*：支架，黄色星星：新骨，红色新月形：开始愈合的病变位置。

图7：治疗后8周，不同组中平均新骨矿化的比较图。A：对照组，B：支架组，C：细胞加支架组，D：支架加细胞和水飞蓟素组。平均值由五次重复实验得出（n=5）。使用方差分析和Tukey检验（均值SEM）在P<0.05下进行均值比较。*：表示在p<0.05的置信水平下存在显著性差异。**：表示在p<0.01的置信水平下存在显著性差异。***：表示在p<0.001的置信水平下存在显著性差异。

图8：戈德纳-马森染色图像。组1：对照组，组2：单独的支架组，组3：细胞加支架组，组4：细胞加支架组并口服水飞蓟素。A：缩放40倍，B：缩放100倍，C：缩放400倍，D：缩放400倍。黑色矩形：一个选定的区域，需要进一步放大，红色矩形：在D部分中以更高的放大倍数显示了支架位置，*：支架，黄色星星：新骨，红色新月形：开始愈合的病变位置。