DOI:10.1016/j.talanta.2020.121054

酶联免疫分析法（ELISA）对靶分子具有高度特异性和选择性，并且便于现场检测。然而，在许多情况下，由于缺乏高灵敏度，很难显示出检测痕量目标分子的显著比色信号。因此，检测需要使用分析仪器，这限制了ELISA在现场检测中的应用。在本研究中，通过将ELISA结合到微孔和纳米纤维膜的表面上，制备了一种高灵敏度、肉眼可检测的氯霉素（CAP）比色生物传感器。纳米纤维的高比表面积显著增加了共价连接到纤维表面上的抗体数量以及传感器与样品中存在的抗原的结合能力。通过这种整合，ELISA传感器的灵敏度大大提高，并且痕量目标可以显示肉眼可检测的颜色。免疫测定传感器在0.3 ng/mL的浓度下，对氯霉素（CAP）表现出明显的肉眼可分辨颜色。纳米纤维膜免疫检测传感器的成功设计和制备为无需任何仪器辅助的现场检测传感器的研制提供了新的途径。

图1.纳米纤维膜的微观结构和化学修饰。a）PVA-共聚-PE膜的SEM和b）纤维直径分布；c）PVA-共聚-PE膜与三种试剂（CC，GA和DSC）和蛋白质的反应图解；d）CC、GA和DSC修饰前后PVA-共聚-PE膜的FTIR光谱；e）与CC、GA和DSC反应后这些纳米纤维膜的SEM图像和f）纤维分布；g）这些膜的水接触角。

图2.将抗体固定在纳米纤维膜上。a）固定有FITC-IgG的三种修饰膜的荧光图像；b）固定在修饰膜上的抗体量；c）固定化反应效率；d）固定有抗体后的纳米纤维膜的SEM图像；e）这些膜的纤维分布。

图3.通过a）CC、b）GA和 c）DSC修饰的膜检测CAP的光学图像和颜色强度（R值） 。

图4.竞争性ELISA强度比。绘制颜色强度比与CAP浓度的关系。

图5.常规ELISA的光学图像和颜色强度（吸光度或R值）。a）基于96孔板的ELISA；b）基于硝酸纤维素的ELISA。

图6.传感器的灵敏度和实用性。a）各种抗生素的干扰；b）参照，野生鲑鱼和加标鲑鱼样品的光学图像和c）R值。