DOI:10.1016/j.msec.2020.110931

碱性磷酸酶（ALP）是成骨细胞活性的重要生物标志物。目前，ALP活性已被用于研究骨矿化机制和骨活性生物材料等。通常通过破坏性方法对正在评估骨传导生物材料的生长细胞或细胞裂解液进行ALP定量分析。这项工作探讨了一种无损比色法测定培养上清液对成骨细胞来源外泌体的ALP活性。以复合有ZnO的PCL骨传导电纺支架为参考材料，对该方法的有效性进行了评估。结果表明，通过无损检测成骨细胞衍生外泌体的ALP活性，可以随时间监测由骨传导支架诱导的成骨细胞系矿化。因此，这种非破坏性方法被认为是定量生物材料骨传导性甚至评估干细胞成骨细胞反应的可靠替代技术。

图1.hFOB培养物的ALP活性。根据原位（a）、细胞裂解物（b）和培养上清液（c）技术测定ALP活性。 *表示每种技术在日期之间存在显著性差异（p＜0.05，单向方差分析）。

图2.离心产物的ALP活性。随时间推移（a）和第14天，在不同的离心分离阶段，未离心、3000 g和100,000 g（b）培养上清液的ALP活性。增加离心速度以在连续的几轮中将较小的颗粒沉淀。不同阶段在T150培养瓶上以25.000个细胞/ml接种的hFOB细胞的显微照片（c）。放大条=100 µm。**统计显著性相当于p≤0.05。

图3.纳米EV表征。在培养的第14天，NTA从hFOB上清液和中等+10%FBS浓缩液获得的纳米EV的大小和浓度。插图显示了中等+10%FBS的颗粒浓度的放大（a）和hFOB上清液浓缩物的纳米EV的TEM显微照片（b）。

图4.原位ALP活性与培养上清液的关系。通过破坏性原位技术（a）和无损上清液技术（b）获得的TCP、PCL垫和PCL+ZnO垫的ALP活性。如所观察到的，上清液技术反映了与原位技术相同的hFOB响应，这证明了此处分析的无损方法的功效。**和*的统计显著性分别相当于p≤0.005和p≤0.05。