DOI: 10.1039/c9an02340b
本文开发了一种无酶无标记视觉传感策略，以使用等离子体纳米平台灵敏地检测凝血酶。在电纺纳米纤维膜上设计了凝血酶触发的催化发夹组装（CHA）扩增反应和G-四链体/血红素DNAzyme控制的等离子体信号读出装置。纳米纤维膜由于其较大的比表面积和多孔结构，提高了B-H2的负载能力和界面相互作用效率。利用这种等离子体纳米平台对人血清样品中低至1.0pM的凝血酶进行了灵敏的肉眼检测。这种视觉策略可以很好地区分凝血酶和其他共存蛋白。此外，视觉传感平台具有良好的可重用性和长期稳定性。该无酶无标记等离子体纳米平台价格低廉，易于操作且灵敏度高，在蛋白质生物标志物的即时检测中具有潜在的应用前景。
图1.用于可视化痕量凝血酶的等离子体纳米平台示意图。（A）凝血酶触发的CHA扩增反应和（B）DNAzyme控制的等离子体信号读出装置。
图2.（A）在不同条件下对应于基于H2改性的纳米纤维膜的等离子体纳米平台的UV-vis吸收光谱：（a）：无；（b）H1；以及（c）H1+10nM凝血酶。插图显示了颜色变化的相应照片。（B）本地PAGE数据。泳道1：H1；泳道2：H2；泳道3：H1+H2；泳道4：H1+H2+200nM凝血酶；泳道5：退火（H1+H2）；泳道6：G4；泳道7：H1+H2+200nM凝血酶+G4；泳道8：退火（H1+H2）+G4。[H1]=[H2]=[G4]=0.8μM。
图3.在测试溶液中DNAzyme/纳米纤维膜（A）与含有0nM（虚线）或10nM（实线）凝血酶的DNAzyme/连续薄膜（B）的性能比较。
图4.用等离子体纳米平台检测凝血酶时，测试溶液（A）以及550nm（-ΔA550）（B）处紫外-可见吸收度相应降低的照片。有或没有10nM凝血酶（C和D）作用下生长的Au纳米粒子的TEM图像。
图5.等离子体纳米平台对凝血酶的抗BSA、HSA、GOx和Lzm的特异性。插图显示了相应的颜色变化。所有蛋白质的浓度为5nM。
图6.真实样品中凝血酶检测的照片。
