为了更好的提高神经导管支架的生物相容性，并且达到仿生神经结构的目的，本课题结合三维（3D）打印技术，将上述具有良好生物相容性且可以缓释 NGF的NGF@PDA NPs纳米球包裹于水凝胶体系中，然后三维打印得到可以缓释NGF的复合水凝胶纤维，最后将该复合水凝胶纤维取向填充到 PLCL/SF 纳米纤维神经导管内部，得到负载 NGF 复合水凝胶纤维填充式神经导管支架。

二、实验步骤

（1）NGF@PDA NPs 混合水凝胶体系的制备：将质量比为 1:1 的明胶和低分子透明质酸钠加入纯水溶液中充分溶胀 1 h。然后放置在恒温磁力搅拌器上 60℃边搅拌边溶解 2 h，直至材料均充分溶解，浓度为 20%（w/v）。高压蒸汽灭菌锅上 121℃灭菌 20 min 后取出，待冷却至 35-40℃，此时将一定量的 NGF@PDA NPs 加入后搅拌均匀。随后，该混合液将逐步凝固成水凝胶。

（2）3D 打印负载 NGF 复合水凝胶纤维：以上述负载 NGF@PDA NPs 的水凝胶为基本材料，用 3D 打印机设备打印成 5*2 cm2的单层支架，在 MAM 打印系统软件中载入 3D 模型，针头采用 21G 不锈钢针头（内径为 0.52 mm）进行打印。具体打印参数为：打印温度为 37℃，层高设为 0.45 mm，网格填充宽度为 2 mm，填充角度为 90o/0o，针头沿 XY 轴的运动速度为 9mm/s，T 轴(螺杆)的挤料速度设为 0.01mm/s。

对 3D 打印得到的负载 NGF 复合水凝胶纤维，进行交联处理。所选用的交联剂为 EDC/NHS，将负载 NGF 水凝胶纤维浸泡于 95%乙醇水溶液中（EDC 含量为 5 mg/mL，NHS 含量为 3 mg/mL）。浸泡交联 6 h 后，取出复合水凝胶纤维支架，然后冷冻干燥处理，备用。

（3）复合水凝胶纤维填充式神经导管组的制备：将上述冷冻干燥后的复合水凝胶纤维支架放置于静电纺丝制备的 PLCL/SF（75:25）纳米纤维导管空腔内，得到复合水凝胶纤维填充式神经导管。 此外，不添加 NGF@PDA NPs 的水凝胶纤维同样经过 3D 打印，并在交联后添加到 PLCL/SF 纳米纤维导管空腔内作为填充物，最终得到水凝胶纤维填充式神经导管为对照组进行后续实验