一、目的 |
采 用 同 轴 静 电 纺 丝 技 术 构 建 携 载 骨 形 态 发 生 蛋 白 -2 ( bone morphogenetic protein-2,BMP-2)和人胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)的纳米纤维屏障膜,体外实验研究携载生长因子的纳米纤维膜促进干细胞的成骨分化作用,体内实验研究其对 SD 大鼠颅骨缺损的修复效果。 |
二、方法 |
(1)选用参数 15kV 高压,15cm 工作距离,芯层与壳层推进速度1mL/h:10mL/h,制备同轴静电纺丝纳米纤维屏障膜。 (2)体外实验:分离培养SD 大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),与材料共培养,观察细胞在膜上的黏附情况;MTT 检测细胞在膜上的生长状况;ALP 检测与茜素红染色,评估纤维膜体外促进干细胞成骨分化能力;Q-PCR 检测干细胞成骨基因的表达。 (3)体内实 验 : 50 只 SD 大 鼠 分 为 五 组 : 载 药 组 BMP-2/IGF-1-SF/P(LLA-CL) ,BMP-2-SF/P(LLA-CL),IGF-1-SF/P(LLA-CL);非载药组:SF/P(LLA-CL);空白对照组;制备大鼠颅骨 8mm 骨缺损,将材料植入大鼠颅骨缺损区。饲养 4 周,8周,12 周,对离体颅骨组织行 micro-CT 检查与组织学检查。 |
三、结果 |
(1)成功制备芯层携载生长因子的同轴静电纺丝; (2)体外实验表明:BMSCs 在纳米纤维膜上黏附良好,MTT 检测细胞在膜上生长状态良好,ALP 检测载药组碱性磷酸酶活性增加,茜素红染色有钙结节形成。 (3)体内实验显示:术后动物生长状态良好,micro-CT 检测新生骨体积与骨密度,实验组与对照组相比有显著性差异(P<0.05),HE 染色显示实验组新生骨组织面积大于对照组。 |